pcr 威斯腾生物——细胞药筛/动物建模/基因编辑 专业服务！ 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)，简称pcr，是一种分子生物学技术，用于放大特定的dna片段。可看作生物体外的特殊dna复制。pcr(聚合酶链式反应）是利用dna在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°c左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至dna聚合酶适反应温度（72°c左右），dna聚合酶沿着到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的pcr仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。pcr这项技术，被广泛地运用在医学和生物学的实验室，例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制以及亲子鉴定。 pcr原理 pcr技术的基本原理类似于dna的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。pcr由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板dna的变性：模板dna经加热至93℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板dna与引物的退火（复性）：模板dna经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板dna单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 pcr过程 dna变性：taq酶（90℃-96℃），双链dna模板在热作用下，键断裂，形成单链dna 退火：（25℃-65℃），系统温度降低，引物与dna模板结合，形成局部双链。 延伸：（70℃-75℃），在taq酶（在72℃左右，活性优秀）的作用下，以dntp为原料，从引物的3′端→5′端延伸，合成与模板互补的dna链。 每一循环经过变性、退火和延伸，dna含量即增加一倍。现在有些pcr因为扩增区很短，即使taq酶活性不是优秀也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。 pcr/碱基互补配对/dna变性/半保留复制 威斯腾生物——细胞药筛/动物建模/基因编辑 专业服务！ 【地址】重庆高新区生物医药研发产业园d栋 【全国免费电话】400-675-6758 【实验预订电话】023-65316016，023-65316556 【网址】www.cqwe； 新版网址：www.cqwe； cas9网址: www.bg； sci网址：www.weste； 【邮箱】huameixina；western6 【传真】023-65227525